MAPK信号通路介导养精种玉汤有效部位调节猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制

目的通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路探讨养精种玉汤正丁醇(ZDC)及乙酸乙酯(YSYZ)提取物降低猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制。方法分离并培养猪卵巢颗粒细胞,将细胞按不同浓度的MAPK抑制剂PD98059孵育,分为0(空白对照)、1、3、10、25μmol/L共5组,培养24 h后,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测17α-羟化酶/C17,20-裂解酶(cytochrome P450c17a,CYP17)mRNA表达水平,应用放射免疫测定法(RIA)检测细胞上清液雄激素(睾酮)含量,筛选最佳的PD98059作用浓度;采用10μmol/L PD98059干预卵巢颗粒细胞24 h后,将细胞培养液更换成含或不含有不同浓度(0、1、5、25、50 mg/m L)的养精种玉汤有效成分提取物ZDC及YSYZ干预不同的时间(3、6、18、24 h)后,采用Western blot法检测各组磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、c-Fos及CYP17蛋白表达水平,RIA法检测细胞上清液睾酮含量。结果 10μmol/L PD98059可明显降低猪卵巢颗粒细胞p-ERK1/2蛋白表达,增加CYP17 mRNA表达,并可增加细胞上清液睾酮含量(P0.05)。当养精种玉汤ZDC、YSYZ提取物浓度为25 ng/m L、作用时间为6 h时,可增加猪卵巢颗粒细胞p-ERK1/2、c-Fos蛋白水平并降低CYP17蛋白的表达,降低细胞上清液睾酮含量(P0.05)。结论养精种玉汤有效成分通过增加MAPK的活性从而降低猪卵巢颗粒细胞的雄激素生成。     

养精种玉汤对高雄激素培养的卵巢颗粒细胞PCNA、StAR、FSHR mRNA与蛋白表达的影响

目的观察养精种玉汤对高雄激素培养的卵巢颗粒细胞（GC）增殖细胞核抗原（PCNA）、类固醇激素合成急性调节蛋白（STAR）与促卵泡生成素受体（FSHR）mRNA及其蛋白表达的影响。方法以原代培养猪卵巢GC为实验对象。分别将促卵泡生成素（FSH）、养精种玉汤加入受过量丙酸睾酮处理的GC培养体系中。48h后,利用RT-PCR和Western blot分别检测PCNA、StAR、FSHRmRNA及其蛋白表达量。结果过量雄激素抑制GC的PCNA、StAR、FSHRmRNA及蛋白的表达,养精种玉汤和FSH能逆转雄激素的抑制作用,促进GCPCNA、StAR、FSHRmRNA与蛋白的表达。结论养精种玉汤有拮抗过量雄激素对PCNA、StAR、FSHRmRNA及其蛋白表达的抑制作用,推测养精种玉汤通过促进PCNA、StAR、FSHRmRNA与蛋白的表达以及拮抗过多雄激素的负作用,改善卵泡发育异常。     

低频电针对多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织Bax、Bcl-2表达的影响

目的探讨低频电针对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome, PCOS）大鼠卵巢组织中Bax、Bcl-2表达的影响。方法24只 3周龄雌性SD大鼠等量随机分成模型组（M组）、针刺组（A组）与正常对照组（C组）,每组8只。通过注射睾酮和高脂饲料喂养进行造模。从11周龄开始,A组连续5周,每周5次,每次30 min低频电针,M组和C组不干预。在治疗前后,空腹取血检测睾酮（T）、胰岛素（FINS）、血糖（FBG）,比较胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。卵巢组织通过HE染色观察结构,采用荧光定量PCR及Western blot检测卵巢组织中Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达,并计算Bax/Bcl-2比值。结果自8周龄起, M组体重均重于C组（P<0.05, P<0.01）;自14周龄起,A组体重明显低于M组（P<0.05）。11周及16周,M组血清T、FINS及HOMA-IR水平较C组显著升高（P<0.01）;16周龄A组血清T、FINS及HOMA-IR水平较M组及治疗前明显降低（P<0.05, P<0.01）。A组卵巢切片HE染色可见多个黄体存在,囊性卵泡减少,颗粒细胞层比M组明显增厚;M组Bax蛋白及mRNA表达高于C组,Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组（P<0.05, P<0.01）;A组Bax蛋白及mRNA表达低于M组（P<0.05）,Bax/Bcl-2比值低于M组（P<0.01）。结论低频电针可能通过降调卵巢组织中Bax mRNA及蛋白表达和降低Bax/Bcl-2比值,抑制颗粒细胞凋亡,改善卵巢局部微环境,促进黄体生成,恢复正常排卵周期。     

电针对PCOS大鼠子宫内膜IRS1和IRS2 mRNA表达及胰岛素敏感性的影响

目的观察电针对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠子宫内膜胰岛素受体底物(IRS)1和IRS2基因表达及胰岛素敏感性的影响,为电针提高PCOS患者妊娠率,减少流产率的临床应用提供实验依据。方法24日龄雌性SD大鼠皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)的麻油溶液结合高脂饮食造模,正常组同期皮下注射麻油,喂以普通饲料;PCOS大鼠模型随机分为模型组、电针组,各组均于80日龄起进行干预,其中电针组电针治疗,1周3次,连续5周,而正常组、模型组每天只捆绑不针刺,1周3次,连续5周。治疗前后尾静脉取血,氧化酶法测定空腹血糖(FPG)水平,罗氏电化学发光法测定空腹胰岛素(FINS)水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR指数),治疗结束后,各组大鼠断头处死,留取子宫内膜标本,用实时定量荧光PCR法检测子宫内膜组织IRS1、IRS2 mRNA表达。结果各组治疗前后的FPG水平变化差异均无统计学意义(P0.05);治疗前,模型组FINS水平、HOMA-IR指数均显著高于正常组(P0.05);治疗后,电针组FINS、HOMA-lR水平显著低于模型组(P0.05);与正常组比较,模型组子宫内膜组织IRS1、IRS2 mRNA表达升高(P0.05);与模型组比较,电针组子宫内膜组织IRS1、IRS2 mRNA表达降低(P0.05)。结论电针具有改善PCOS大鼠胰岛素敏感性,提高子宫内膜组织IRS1、IRS2 mRNA表达的作用,这可能是其改善子宫内膜胰岛素抵抗的机制之一。